ABSTRACT
During the morphogenic process from epimastigote to metacyclic trypomastigote stage changes at molecular levels are produced. In the present work the incorporation of macromolecule precursors L [3H]-leucine, [3H]-thymidine and [3H]-uridine was used to monitor the differences between parasites growing with and without specific stimulation for morphogenesis (SEpi and NEpi, respectively). The peak of maximum [3H]-uridine incorporation was earlier in the SEpi than in NEpi (3 vs 4 days, respectively) reaching 129
higher values. Even at day 2, SEpi already showed values of [3H]-uridine incorporation slightly higher (29
) than the maximum reached by NEpi. One the other hand the peak of L-[3H]-leucine incorporation was 48 h delayed comparing SEpi vs NEpi with quantitatively similar patterns, while no differences were registered for [3H]-thymidine incorporation. Therefore the [3H]-uridine incorporation may constitute an earlier marker of morphogenesis since the process was optically detected starting day at 6.
ABSTRACT
During the morphogenic process from epimastigote to metacyclic trypomastigote stage changes at molecular levels are produced. In the present work the incorporation of macromolecule precursors L [3H]-leucine, [3H]-thymidine and [3H]-uridine was used to monitor the differences between parasites growing with and without specific stimulation for morphogenesis (SEpi and NEpi, respectively). The peak of maximum [3H]-uridine incorporation was earlier in the SEpi than in NEpi (3 vs 4 days, respectively) reaching 129
higher values. Even at day 2, SEpi already showed values of [3H]-uridine incorporation slightly higher (29
) than the maximum reached by NEpi. One the other hand the peak of L-[3H]-leucine incorporation was 48 h delayed comparing SEpi vs NEpi with quantitatively similar patterns, while no differences were registered for [3H]-thymidine incorporation. Therefore the [3H]-uridine incorporation may constitute an earlier marker of morphogenesis since the process was optically detected starting day at 6.
ABSTRACT
En el presente trabajo se estudió el comportamieto de varias cepas y clones de Epi de T. cruzi en medios estimulantes de la diferenciación: M 16, TAUP, TAUS, LIT-hemina y G-IH. Los resultados mostraron que en nuestras condiciones experimentales el medio G-IH fue el único adecuado para producir morfogénesis Epi-Mtc. La temperatura óptima del proceso tanto de multiplicación como de diferenciación en ese medio fue 28-C. el empleo G-IH empobrecido en nutrientes por dilución no indujo diferenciación. Los parásitos que se obtuvieron de medio bifásico entre 24 a 48 h de cultivados fueron los óptimos para obtener morfogénesis. El bloqueo de la oferta de Ca++ externo afectó la capacidad de diferenciarse de las cepas Tul y RA en grado variable
Subject(s)
Animals , Trypanosoma cruzi/growth & development , Culture Media , MorphogenesisABSTRACT
Los espectros diferenciales de muestras "reducida menos oxidada" (Red-Ox) y "reducida. CO menos reducida" (Re. CO-Red) de tripomastigotes metacíclicos del Trypanosoma cruzi (cepa Tulahuen) revelaron la presencia de los citocrómos aa3, b, c555 y o. Espectros concordantes se obtuvieron con la fracción mitocondrial de la forma epimastigote de la misma cepa, después de filtrar las membranas por Sephadex G-50 para excluir hemoproteínas espúreas provenientes del medio de cultivo o hemoproteínas solubles (hemoglobina, peroxidasa, catalasa, etc.), o citocrómos P-420 y P-450. El tratamiento de la fracción mitocondrial cruda con guanidina y colato de Na y la formación de complejos con cianuro, revelaron que el citocrómo o es un constituyente integral de esas membranas. El análisis de los piridinahemocrómos provenientes de los citocrómos mitocondriales demostró la presencia de los hemos A, B y C. Una banda espectral a 625 nm en los espectros de los tripomastigotes, en las membranas mitocondriales, y en los piridina-hemocrómos indicó la presencia de un citocrómo d. Un examen comparativo del contenido en citocrómos o y b de una serie de poblaciones de T. cruzi, provenientes originariamente en su mayoría de pacientes con formas agudas o crónicas de la enfermedad de Chagas, demostró variabilidad en el contenido en citocrómos y falta de correlación de este parámetro con las propiedades biológicas del parásito, en particular con la letalidad para el ratón
Subject(s)
Animals , Cytochromes/analysis , Trypanosoma cruzi/enzymologyABSTRACT
La hemolinfa total de T. infestans, asi como las variantes libres de hemocitos, o libres de hemocitos y quinonas, indujeron curvas de crecimiento y diferenciacion del T. cruzi semejantes cuando se utilizaron como suplemento del medio de Grace modificado, indicando que la presencia de hemocitos y quinonas no influyen en el proceso de multiplicacion de los epimastigotes ni en su diferenciacion a metaciclicos. La cantidad minima de cualquiera de las variantes para lograr diferenciacion fue del 2%, no detectandose efecto inhibitorio aun en concentraciones del 30%. Esta diferenciacion se produjo durante la fase de crecimiento exponencial del cultivo alcanzado aproximadamente un 80%